PRODUCT CLASSIFICATION
一、 樣品前處理方法
2g雞肉,加入15mL水,渦旋混勻,超聲提取10min,2000xg離心5min,取3mL上清進行固相萃取,固相萃取柱為HyperSep HyperCarb 色譜柱(200mg/3mL,貨號60106-301),固相萃取步驟如下:
活化:1mL 乙腈,1mL乙醇,負壓過柱
上樣:3mL 上清液,1mL/min速率過柱
洗脫:500μL 20%乙腈-水溶液洗脫,1mL/min
洗脫兩次,合并洗脫液,直接進行LC-MS/MS分析。
二、 樣品分析方法
1. 儀器
Accela HPLC;TSuantum Access MAX 三重串聯四級桿質譜檢測器;Hypercarb 液相色譜柱(100x2.1mm,5μm,貨號35005-102130)。
2. 參數設置
液相參數:
柱溫:室溫
進樣量:10μL
梯度:
質譜參數:
離子化模式:電噴霧電離,正離子模式;
質譜掃描方式:選擇反應監測(SRM);
分辨率:單位分辨率;
毛細管溫度:350℃;
霧化溫度:350℃;
噴霧電壓:3700V;
鞘氣壓力:30 arb;
輔助氣流速:10 arb;
碰撞氣壓力:1.0 mTorr;
離子對參數見下表:
3.色譜圖
見圖1。
圖 1 雞肉加標樣品檢測結果(利巴韋林濃度,1ppb;同位素內標濃度:1ppb)
三、 結果與討論
利巴韋林為強極性化合物,使用水作為溶劑即可將其*提取。但常規色譜柱無法將其保留。Hypersep Hypercarb是Thermo Scientific*的固相萃取填料,基質為具有平面結構的多孔石墨化碳(PGC),能與極性化合物產生偶極-偶極相互作用而使其具有強保留性質,特別適合極性化合物的純化。
本實驗中,使用HyperSep Hypercarb 進行樣品的純化,可以得到滿意的回收率,在50ppb的加樣回收試驗中,回收率為121.8%,重現性良好。且方法簡單,與現有方法相比,避免了反復調節pH值的步驟。而且,使用20%乙腈即可將目標物洗脫,避免在后繼的分析過程中產生明顯的溶劑效應。
在分析過程中發現,利巴韋林色譜峰附近容易出現干擾物質,根據文獻判斷,可能為內源性的異構體。該異構體容易使結果出現假陽性,但使用HyperCarb色譜柱,在極為簡單的流動相條件下,即可實現分離。